عیب یابی و رفع آن در استفاده از کیت استخراج DNA از خون

گاهی بعد از پروسه  استخراج DNA از خون با یکسری از مشکلات غیرطبیعی روبه رو میشوید. پیشنهاد میکنیم قبل از استفاده از کیت استخراج DNA از خون موارد و نکات زیر را به دقت مطالعه فرمایید.

از جمله مشکلات فنی  در استخراج DNA  با استفاده از کیت استخراج DNA از خون ، ادعای کاربر در مقدار بسیار کم DNA استخراج شده میباشد.

 

 

در ذیل به اختصار چند تا از نکات مهم و موثر  در بروز این مشکل عنوان میشود که از مهمترین عوامل موثر در عدم یا مقدار بسیار کم DNA استخراج شده است .

1 .مقدار کم سلول ها در نمونه ی اولیه

راه حل مناسب جهت رفع آن : استخراج DNA را با نمونه غلیظ تری از خون و یا از  بافی کوت انجام می دهیم .

2.لیز سلولی ضعیف به سه دلیل عمده اتفاق می افتد:

الف) کم بودن فعالیت پروتئیناز K

پروسه استخراج را با نمونه جدید تکرار کنید و از پروتئیناز K تازه و یا از استوک ان استفاده کنید.

ب) میکس ناکافی نمونه با BG

پروسه استخراج را با نمونه جدید تکرار کنید و نمونه با BG را کاملا میکس کنید .

پ) ناکافی بودن زمان انکوباسیون

پروسه استخراج را با نمونه جدید تکرار کنید و زمان انکوباسیون را طولانی تر کنید.

 

3. اضافه نکردن اتانول به نمونه قبل از بردن روی ستون

پروسه استخراج را با نمونه جدید تکرار کنید.

 

4 .تهیه نادرست wash buffer که معمولا به دو دلیل زیر میباشد:

الف) در ابتدا اتانول به wash buffer اضافه نشده است.

اطمینان حاصل کنید که حجم درست اتانول 100-96 %  به wash buffer در ابتدا اضافه شده است . پروسه استخراج را با نمونه جدید تکرار کنید.

ب) حجم و درصد اتانول اضافه شده در ابتدامناسب نبوده است.

اطمینان حاصل کنید که حجم درست اتانول 100-96 %  به wash buffer در ابتدا اضافه شده است . پروسه استخراج را با نمونه جدید تکرار کنید.

 

5 .ناکارامد بودن الوشن بافر که  معمولا به دو دلیل زیر میباشد :

الف) پ هاش  اب (ddH2o) برای الوشن اسیدی است.

اطمینان حاصل کنید که PH ddH2o بین 9.0-7.5 است. از الوشن بافر اماده استفاده کنید.

ب) الوشن بافر یا ddH2o بطور کامل جذب ستون نشده است .

بعد از اضافه کردن الوشن بافر یا ddH2o ، پس از 5 دقیقه ستونها را سانتریفیوژ کنید.

 

ادامه مطلب در عیب یابی  و رفع آن در استفاده از کیت استخراج DNA از خون